Tak fordi du besøger nature.com. Den browserversion, du bruger, har begrænset CSS-understøttelse. For at få den bedste oplevelse anbefaler vi at bruge den nyeste browserversion (eller at deaktivere kompatibilitetstilstand i Internet Explorer). Derudover vil dette websted ikke indeholde stilarter eller JavaScript for at sikre fortsat understøttelse.
Melamin er en anerkendt fødevareforurening, der kan være til stede i visse fødevarekategorier, både utilsigtet og forsætligt. Formålet med denne undersøgelse var at verificere detektion og kvantificering af melamin i modermælkserstatning og mælkepulver. I alt 40 kommercielt tilgængelige fødevareprøver, herunder modermælkserstatning og mælkepulver, fra forskellige regioner i Iran blev analyseret. Det omtrentlige melaminindhold i prøverne blev bestemt ved hjælp af et højtydende væskekromatografi-ultraviolet (HPLC-UV) system. En kalibreringskurve (R2 = 0,9925) blev konstrueret til detektion af melamin i området 0,1-1,2 μg mL-1. Kvantificerings- og detektionsgrænserne var henholdsvis 1 μg mL-1 og 3 μg mL-1. Melamin blev testet i modermælkserstatning og mælkepulver, og resultaterne viste, at melaminniveauerne i modermælkserstatnings- og mælkepulverprøverne var henholdsvis 0,001-0,095 mg kg-1 og 0,001-0,004 mg kg-1. Disse værdier er i overensstemmelse med EU-lovgivningen og Codex Alimentarius. Det er vigtigt at bemærke, at forbruget af disse mejeriprodukter med reduceret melaminindhold ikke udgør en væsentlig risiko for forbrugernes sundhed. Dette understøttes også af resultaterne af risikovurderingen.
Melamin er en organisk forbindelse med molekylformlen C3H6N6, der er udvundet af cyanamid. Den har en meget lav opløselighed i vand og indeholder cirka 66 % nitrogen. Melamin er en udbredt industriel forbindelse med en bred vifte af legitime anvendelser i produktionen af ​​plast, gødning og fødevareforarbejdningsudstyr (herunder fødevareemballage og køkkenudstyr)1,2. Melamin bruges også som lægemiddelbærer til behandling af sygdomme. Den høje andel af nitrogen i melamin kan føre til misbrug af forbindelsen og til at give fødevareingredienser proteinmolekylers egenskaber3,4. Derfor øger tilsætning af melamin til fødevarer, herunder mejeriprodukter, nitrogenindholdet. Det blev således fejlagtigt konkluderet, at proteinindholdet i mælk var højere, end det faktisk var.
For hvert gram melamin, der tilsættes, vil proteinindholdet i fødevarer stige med 0,4 %. Melamin er dog meget opløseligt i vand og kan forårsage mere alvorlig skade. Tilsætning af 1,3 gram melamin til flydende produkter såsom mælk kan øge mælkens proteinindhold med 30 %5,6. Selvom melamin tilsættes animalske og endda menneskelige fødevarer for at øge proteinindholdet7, har Codex Alimentarius-kommissionen (CAC) og nationale myndigheder ikke godkendt melamin som et fødevaretilsætningsstof og har opført det som farligt, hvis det indtages, inhaleres eller absorberes gennem huden. I 2012 opførte Verdenssundhedsorganisationens (WHO) Internationale Agentur for Kræftforskning melamin som et kræftfremkaldende stof i klasse 2B, fordi det kan være skadeligt for menneskers sundhed8. Langvarig eksponering for melamin kan forårsage kræft eller nyreskade2. Melamin i fødevarer kan danne komplekser med cyanursyre og danne vanduopløselige gule krystaller, der kan forårsage skade på nyre- og blærevæv samt urinvejskræft og vægttab9,10. Det kan forårsage akut madforgiftning og i høje koncentrationer død, især hos spædbørn og småbørn.11 Verdenssundhedsorganisationen (WHO) har også sat den tolerable daglige indtagelse (TDI) af melamin for mennesker til 0,2 mg/kg kropsvægt pr. dag baseret på CAC-retningslinjer.12 Den amerikanske fødevare- og lægemiddelstyrelse (FDA) har sat den maksimale restgrænse for melamin til 1 mg/kg i modermælkserstatning og 2,5 mg/kg i andre fødevarer.2,7 I september 2008 blev det rapporteret, at flere indenlandske producenter af modermælkserstatning havde tilsat melamin til mælkepulver for at øge proteinindholdet i deres produkter, hvilket resulterede i mælkepulverforgiftning og udløste en landsdækkende melaminforgiftningshændelse, der gjorde mere end 294.000 børn syge og mere end 50.000 indlagt på hospitalet. 13
Amning er ikke altid muligt på grund af forskellige faktorer, såsom vanskeligheder i bylivet, sygdom hos mor eller barn, hvilket fører til brugen af ​​modermælkserstatning til at fodre spædbørn. Som følge heraf er der blevet etableret fabrikker for at producere modermælkserstatning, der er så tæt som muligt på modermælk i sammensætning14. Modermælkserstatning, der sælges på markedet, er normalt lavet af komælk og er normalt lavet med en speciel blanding af fedtstoffer, proteiner, kulhydrater, vitaminer, mineraler og andre forbindelser. For at være tæt på modermælk varierer protein- og fedtindholdet i modermælkserstatningen, og afhængigt af mælketypen er den beriget med forbindelser som vitaminer og mineraler såsom jern15. Da spædbørn er en følsom gruppe, og der er risiko for forgiftning, er sikkerheden ved indtagelse af mælkepulver af afgørende betydning for sundheden. Efter melaminforgiftningssagen blandt kinesiske spædbørn har lande over hele verden været meget opmærksomme på dette problem, og følsomheden på dette område er også steget. Derfor er det særligt vigtigt at styrke kontrollen med produktionen af ​​modermælkserstatning for at beskytte spædbørns sundhed. Der findes forskellige metoder til at detektere melamin i fødevarer, herunder højtydende væskekromatografi (HPLC), elektroforese, sensorisk metode, spektrofotometri og antigen-antistof enzymbundet immunosorbentassay16. I 2007 udviklede og offentliggjorde den amerikanske fødevare- og lægemiddelstyrelse (FDA) en HPLC-metode til bestemmelse af melamin og cyanursyre i fødevarer, hvilket er den mest effektive metode til bestemmelse af melaminindhold17.
Melaminkoncentrationer i modermælkserstatning målt ved hjælp af en ny infrarød spektroskopiteknik varierede fra 0,33 til 0,96 milligram pr. kilogram (mg kg-1). 18 En undersøgelse i Sri Lanka viste melaminniveauer i sødmælkspulver fra 0,39 til 0,84 mg kg-1. Derudover indeholdt importerede prøver af modermælkserstatning de højeste niveauer af melamin, henholdsvis 0,96 og 0,94 mg/kg. Disse niveauer er under den lovpligtige grænse (1 mg/kg), men et overvågningsprogram er nødvendigt for forbrugersikkerheden. 19
Adskillige undersøgelser har undersøgt niveauet af melamin i iranske modermælkserstatninger. Omkring 65 % af prøverne indeholdt melamin med et gennemsnit på 0,73 mg/kg og et maksimum på 3,63 mg/kg. Et andet studie rapporterede, at niveauet af melamin i modermælkserstatning varierede fra 0,35 til 3,40 μg/kg, med et gennemsnit på 1,38 μg/kg. Samlet set er tilstedeværelsen og niveauet af melamin i iranske modermælkserstatninger blevet vurderet i forskellige undersøgelser, hvor nogle prøver, der indeholder melamin, overstiger den maksimale grænse, der er fastsat af myndighederne (2,5 mg/kg/foder).
I betragtning af det enorme direkte og indirekte forbrug af mælkepulver i fødevareindustrien og den særlige betydning af modermælkserstatning i ernæring af børn, havde denne undersøgelse til formål at validere metoden til at detektere melamin i mælkepulver og modermælkserstatning. Faktisk var det første mål med denne undersøgelse at udvikle en hurtig, enkel og præcis kvantitativ metode til at detektere melaminforfalskning i modermælkserstatning og mælkepulver ved hjælp af højtydende væskekromatografi (HPLC) og ultraviolet (UV) detektion. For det andet var formålet med denne undersøgelse at bestemme melaminindholdet i modermælkserstatning og mælkepulver, der sælges på det iranske marked.
De instrumenter, der anvendes til melaminanalyse, varierer afhængigt af fødevareproduktionsstedet. En følsom og pålidelig HPLC-UV-analysemetode blev anvendt til at måle melaminrester i mælk og modermælkserstatning. Mejeriprodukter indeholder forskellige proteiner og fedtstoffer, der kan forstyrre melaminmålingen. Derfor er en passende og effektiv oprydningsstrategi, som bemærket af Sun et al. 22, nødvendig før instrumentanalyse. I denne undersøgelse anvendte vi engangssprøjtefiltre. I denne undersøgelse anvendte vi en C18-søjle til at adskille melamin i modermælkserstatning og mælkepulver. Figur 1 viser kromatogrammet til melamindetektion. Derudover varierede genfindingen af ​​prøverne indeholdende 0,1-1,2 mg/kg melamin fra 95 % til 109 %, regressionsligningen var y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), og den relative standardafvigelse (RSD) varierede fra 0,8 til 2 %. De tilgængelige data indikerer, at metoden er pålidelig i det undersøgte koncentrationsområde (Tabel 1). Den instrumentelle detektionsgrænse (LOD) og kvantificeringsgrænsen (LOQ) for melamin var henholdsvis 1 μg mL−1 og 3 μg mL−1. Derudover udviste melamins UV-spektrum et absorptionsbånd ved 242 nm. Detektionsmetoden er følsom, pålidelig og præcis. Denne metode kan bruges til rutinemæssig bestemmelse af melaminniveauet.
Lignende resultater er blevet offentliggjort af flere forfattere. En højtydende væskekromatografi-fotodiode array (HPLC) metode blev udviklet til analyse af melamin i mejeriprodukter. De nedre kvantificeringsgrænser var 340 μg kg−1 for mælkepulver og 280 μg kg−1 for modermælkserstatning ved 240 nm. Filazzi et al. (2012) rapporterede, at melamin ikke blev påvist i modermælkserstatning ved HPLC. Imidlertid indeholdt 8% af mælkepulverprøverne melamin i et niveau på 0,505-0,86 mg/kg. Tittlemiet et al.23 udførte en lignende undersøgelse og bestemte melaminindholdet i modermælkserstatning (prøvenummer: 72) ved hjælp af højtydende væskekromatografi-massespektrometri/MS (HPLC-MS/MS) til at være ca. 0,0431-0,346 mg kg−1. I en undersøgelse udført af Venkatasamy et al. (2010) blev en grøn kemitilgang (uden acetonitril) og omvendt fase højtydende væskekromatografi (RP-HPLC) anvendt til at estimere melamin i modermælkserstatning og mælk. Prøvekoncentrationsområdet var fra 1,0 til 80 g/ml, og responset var lineært (r > 0,999). Metoden viste genfindinger på 97,2-101,2 over koncentrationsområdet 5-40 g/ml, og reproducerbarheden var mindre end 1,0 % relativ standardafvigelse. Desuden var den observerede LOD og LOQ henholdsvis 0,1 g mL⁻¹ og 0,2 g mL⁻¹²⁴. Lutter et al. (2011) bestemte melaminforurening i komælk og mælkebaseret modermælkserstatning ved hjælp af HPLC-UV. Melaminkoncentrationerne varierede fra < 0,2 til 2,52 mg kg⁻¹. Det lineære dynamiske område for HPLC-UV-metoden var 0,05 til 2,5 mg kg−1 for komælk, 0,13 til 6,25 mg kg−1 for modermælkserstatning med en proteinmassefraktion på <15% og 0,25 til 12,5 mg kg−1 for modermælkserstatning med en proteinmassefraktion på 15%. LOD- og LOQ-resultaterne var 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) for komælk, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) for modermælkserstatning <15% protein og 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) for modermælkserstatning med 15% protein, med et signal-støj-forhold på 3 og 1025 for henholdsvis LOD og LOQ. Diebes et al. (2012) undersøgte melaminniveauer i prøver af modermælkserstatning og mælkepulver ved hjælp af HPLC/DMD. I modermælkserstatning var de laveste og højeste niveauer henholdsvis 9,49 mg kg−1 og 258 mg kg−1. Detektionsgrænsen (LOD) var 0,05 mg kg−1.
Javaid et al. rapporterede, at melaminrester i modermælkserstatning lå i området 0,002-2 mg kg−1 ved hjælp af Fourier-transform infrarødspektroskopi (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai et al.27 foreslog en HPLC-DDA (λ = 220 nm) metode til at estimere melamin og opnåede en LOQ på 0,08 μg mL−1 for mælkepulver, hvilket var lavere end det niveau, der blev opnået i denne undersøgelse. Sun et al. udviklede en RP-HPLC-DAD til detektion af melamin i flydende mælk ved fastfaseekstraktion (SPE). De opnåede en LOD og LOQ på henholdsvis 18 og 60 μg kg−128, hvilket er mere følsomt end den aktuelle undersøgelse. Montesano et al. bekræftede effektiviteten af ​​HPLC-DMD-metoden til vurdering af melaminindhold i proteintilskud med en kvantificeringsgrænse på 0,05-3 mg/kg, hvilket var mindre følsomt end den metode, der blev anvendt i dette studie29.
Analytiske laboratorier spiller uden tvivl en vigtig rolle i at beskytte miljøet ved at overvåge forurenende stoffer i forskellige prøver. Brugen af ​​et stort antal reagenser og opløsningsmidler under analysen kan dog resultere i dannelse af farlige rester. Derfor blev grøn analytisk kemi (GAC) udviklet i 2000 for at reducere eller eliminere de negative virkninger af analytiske procedurer på operatører og miljøet26. Traditionelle melamindetektionsmetoder, herunder kromatografi, elektroforese, kapillærelektroforese og enzymbundet immunosorbentassay (ELISA), er blevet brugt til at identificere melamin. Blandt de mange detektionsmetoder har elektrokemiske sensorer dog tiltrukket sig stor opmærksomhed på grund af deres fremragende følsomhed, selektivitet, hurtige analysetid og brugervenlige egenskaber30,31. Grøn nanoteknologi anvender biologiske veje til at syntetisere nanomaterialer, hvilket kan reducere produktionen af ​​farligt affald og energiforbrug og derved fremme implementeringen af ​​bæredygtige praksisser. Nanokompositter, for eksempel fremstillet af miljøvenlige materialer, kan bruges i biosensorer til at detektere stoffer som melamin32,33,34.
Undersøgelsen viser, at fastfase-mikroekstraktion (SPME) anvendes effektivt på grund af dens højere energieffektivitet og bæredygtighed sammenlignet med traditionelle ekstraktionsmetoder. SPME's miljøvenlighed og energieffektivitet gør det til et fremragende alternativ til traditionelle ekstraktionsmetoder inden for analytisk kemi og giver en mere bæredygtig og effektiv metode til prøveforberedelse35.
I 2013 udviklede Wu et al. en yderst følsom og selektiv overfladeplasmonresonans (mini-SPR) biosensor, der udnytter koblingen mellem melamin og anti-melaminantistoffer til hurtigt at detektere melamin i modermælkserstatning ved hjælp af et immunassay. SPR-biosensoren kombineret med et immunassay (ved hjælp af melaminkonjugeret bovint serumalbumin) er en brugervenlig og billig teknologi med en detektionsgrænse på kun 0,02 μg mL-136.
Nasiri og Abbasian brugte en bærbar sensor med højt potentiale i kombination med grafenoxid-chitosan-kompositter (GOCS) til at detektere melamin i kommercielle prøver37. Denne metode viste ultrahøj selektivitet, nøjagtighed og respons. GOCS-sensoren udviste bemærkelsesværdig følsomhed (239,1 μM−1), et lineært område på 0,01 til 200 μM, en affinitetskonstant på 1,73 × 104 og en LOD på op til 10 nM. Desuden anvendte en undersøgelse udført af Chandrasekhar et al. i 2024 en miljøvenlig og omkostningseffektiv tilgang. De brugte papaya-skalekstrakt som et reduktionsmiddel til at syntetisere zinkoxid-nanopartikler (ZnO-NP'er) på en miljøvenlig måde. Efterfølgende blev en unik mikro-Raman-spektroskopiteknik udviklet til bestemmelse af melamin i modermælkserstatning. ZnO-NP'er udvundet af landbrugsaffald har vist potentiale som et værdifuldt diagnostisk værktøj og en pålidelig, billig teknologi til overvågning og detektering af melamin38.
Alizadeh et al. (2024) anvendte en meget følsom metal-organisk ramme (MOF) fluorescensplatform til at bestemme melamin i mælkepulver. Sensorens lineære område og nedre detektionsgrænse, bestemt ved hjælp af 3σ/S, var henholdsvis 40 til 396,45 nM (svarende til 25 μg kg−1 til 0,25 mg kg−1) og 40 nM (svarende til 25 μg kg−1). Dette område er et godt stykke under de maksimale restniveauer (MRL'er), der er fastsat for identifikation af melamin i modermælkserstatning (1 mg kg−1) og andre fødevare-/foderprøver (2,5 mg kg−1). Fluorescerende sensor (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) udviste højere nøjagtighed og mere præcis målekapacitet end HPLC39 til at detektere melamin i mælkepulver. Biosensorer og nanokompositter i grøn kemi forbedrer ikke kun detektionskapaciteten, men minimerer også miljøfarer i overensstemmelse med principperne for bæredygtig udvikling.
Grønne kemiske principper er blevet anvendt på forskellige metoder til bestemmelse af melamin. Én tilgang er udviklingen af ​​en grøn dispersiv fastfase-mikroekstraktionsmetode, der bruger den naturlige polære polymer β-cyclodextrin tværbundet med citronsyre til effektiv ekstraktion af melamin 40 fra prøver såsom modermælkserstatning og varmt vand. En anden metode bruger Mannich-reaktionen til bestemmelse af melamin i mælkeprøver. Denne metode er billig, miljøvenlig og meget nøjagtig med et lineært område på 0,1-2,5 ppm og en lav detektionsgrænse 41. Derudover blev en omkostningseffektiv og miljøvenlig metode til kvantitativ bestemmelse af melamin i flydende mælk og modermælkserstatning udviklet ved hjælp af Fourier-transform infrarød transmissionsspektroskopi med høj nøjagtighed og detektionsgrænser på henholdsvis 1 ppm og 3,5 ppm 42. Disse metoder demonstrerer anvendelsen af ​​grøn kemiske principper til udvikling af effektive og bæredygtige metoder til bestemmelse af melamin.
Adskillige undersøgelser har foreslået innovative metoder til melamindetektion, såsom brugen af ​​fastfaseekstraktion og højtydende væskekromatografi (HPLC)43, samt hurtig højtydende væskekromatografi (HPLC), som ikke kræver kompleks forbehandling eller ionparreagenser, hvorved mængden af ​​kemisk affald44 reduceres. Disse metoder giver ikke kun nøjagtige resultater til bestemmelse af melamin i mejeriprodukter, men overholder også principperne for grøn kemi, minimerer brugen af ​​farlige kemikalier og reducerer den samlede miljøpåvirkning af den analytiske proces.
Fyrre prøver af forskellige mærker blev testet i triplikat, og resultaterne er præsenteret i tabel 2. Melaminniveauerne i prøverne af modermælkserstatning og mælkepulver varierede fra henholdsvis 0,001 til 0,004 mg/kg og fra 0,001 til 0,095 mg/kg. Der blev ikke observeret signifikante ændringer mellem de tre aldersgrupper for modermælkserstatning. Derudover blev melamin påvist i 80 % af mælkepulveret, men 65 % af modermælkserstatningerne var forurenet med melamin.
Melaminindholdet i industrielt mælkepulver var højere end i modermælkserstatning, og forskellen var signifikant (p < 0,05) (figur 2).
De opnåede resultater var under de grænseværdier, der er fastsat af FDA (under 1 og 2,5 mg/kg). Derudover er resultaterne i overensstemmelse med de grænseværdier, der er fastsat af CAC (2010) og EU45,46, dvs. den maksimalt tilladte grænse er 1 mg kg-1 for modermælkserstatning og 2,5 mg kg-1 for mejeriprodukter.
Ifølge en undersøgelse fra 2023 foretaget af Ghanati et al.47 varierede melaminindholdet i forskellige typer emballeret mælk i Iran fra 50,7 til 790 μg kg−1. Deres resultater var under FDA's tilladte grænse. Vores resultater er lavere end Shoder et al.48 og Rima et al.49. Shoder et al. (2010) fandt, at melaminniveauerne i mælkepulver (n=49) bestemt ved ELISA varierede fra 0,5 til 5,5 mg/kg. Rima et al. analyserede melaminrester i mælkepulver ved hjælp af fluorescensspektrofotometri og fandt, at melaminindholdet i mælkepulver var 0,72-5,76 mg/kg. En undersøgelse blev udført i Canada i 2011 for at overvåge melaminniveauerne i modermælkserstatning (n=94) ved hjælp af væskekromatografi (LC/MS). Melaminkoncentrationerne viste sig at være under den acceptable grænse (foreløbig standard: 0,5 mg kg−1). Det er usandsynligt, at de svigagtige melaminniveauer, der blev opdaget, var en taktik, der blev brugt til at øge proteinindholdet. Det kan dog ikke forklares med brugen af ​​gødning, flytning af beholderindhold eller lignende faktorer. Desuden blev kilden til melamin i mælkepulver importeret til Canada ikke oplyst50.
Hassani et al. målte melaminindholdet i mælkepulver og flydende mælk på det iranske marked i 2013 og fandt lignende resultater. Resultaterne viste, at bortset fra ét mærke af mælkepulver og flydende mælk, var alle andre prøver forurenet med melamin, med niveauer fra 1,50 til 30,32 μg g−1 i mælkepulver og 0,11 til 1,48 μg ml−1 i mælk. Bemærkelsesværdigt blev der ikke påvist cyanursyre i nogen af ​​prøverne, hvilket reducerede risikoen for melaminforgiftning for forbrugerne. 51 Tidligere undersøgelser har vurderet melaminkoncentrationen i chokoladeprodukter, der indeholder mælkepulver. Omkring 94 % af de importerede prøver og 77 % af de iranske prøver indeholdt melamin. Melaminniveauerne i importerede prøver varierede fra 0,032 til 2,692 mg/kg, mens niveauerne i iranske prøver varierede fra 0,013 til 2,600 mg/kg. Samlet set blev der påvist melamin i 85 % af prøverne, men kun ét specifikt mærke havde niveauer over den tilladte grænse.44 Tittlemier et al. rapporterede melaminniveauer i mælkepulver fra 0,00528 til 0,0122 mg/kg.
Tabel 3 opsummerer resultaterne af risikovurderingen for de tre aldersgrupper. Risikoen var mindre end 1 i alle aldersgrupper. Der er således ingen ikke-kræftfremkaldende sundhedsrisiko fra melamin i modermælkserstatning.
Lavere niveauer af kontaminering i mejeriprodukter kan skyldes utilsigtet kontaminering under tilberedningen, mens højere niveauer kan skyldes bevidste tilsætninger. Desuden anses den samlede risiko for menneskers sundhed ved indtagelse af mejeriprodukter med lave melaminniveauer for at være lav. Det kan konkluderes, at indtagelse af produkter, der indeholder så lave niveauer af melamin, ikke udgør nogen risiko for forbrugernes sundhed52.
I betragtning af vigtigheden af ​​fødevaresikkerhedsstyring i mejeriindustrien, især med hensyn til beskyttelse af folkesundheden, er det af største betydning at udvikle og validere en metode til vurdering og sammenligning af melaminniveauer og -rester i mælkepulver og modermælkserstatning. En simpel og præcis HPLC-UV-spektrofotometrisk metode blev udviklet til bestemmelse af melamin i modermælkserstatning og mælkepulver. Metoden blev valideret for at sikre dens pålidelighed og nøjagtighed. Metodens detektions- og kvantificeringsgrænser viste sig at være følsomme nok til at måle melaminniveauer i modermælkserstatning og mælkepulver. Ifølge vores data blev melamin påvist i de fleste af de iranske prøver. Alle påviste melaminniveauer var under de maksimalt tilladte grænser fastsat af CAC, hvilket indikerer, at forbrug af disse typer mejeriprodukter ikke udgør en risiko for menneskers sundhed.
Alle anvendte kemiske reagenser var af analytisk kvalitet: melamin (2,4,6-triamino-1,3,5-triazin) 99% ren (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); HPLC-kvalitet acetonitril (Merck, Darmstadt, Tyskland); ultrarent vand (Millipore, Morfheim, Frankrig). Engangssprøjtefiltre (Chromafil Xtra PVDF-45/25, porestørrelse 0,45 μm, membrandiameter 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Tyskland).
Et ultralydsbad (Elma, Tyskland), en centrifuge (Beckman Coulter, Krefeld, Tyskland) og HPLC (KNAUER, Tyskland) blev anvendt til at fremstille prøverne.
Der blev anvendt en højtydende væskekromatograf (KNAUER, Tyskland) udstyret med en UV-detektor. HPLC-analysebetingelserne var som følger: et UHPLC Ultimate-system udstyret med en ODS-3 C18 analytisk kolonne (4,6 mm × 250 mm, partikelstørrelse 5 μm) (MZ, Tyskland) blev anvendt. HPLC-eluenten (mobil fase) var en TFA/methanol-blanding (450:50 ml) med en flowhastighed på 1 ml min-1. Detektionsbølgelængden var 242 nm. Injektionsvolumenet var 100 μL, og kolonnetemperaturen var 20 °C. Da lægemidlets retentionstid er lang (15 minutter), bør den næste injektion foretages efter 25 minutter. Melamin blev identificeret ved at sammenligne retentionstiden og UV-spektrumtoppen for melaminstandarder.
En standardopløsning af melamin (10 μg/ml) blev fremstillet med vand og opbevaret i køleskab (4 °C) beskyttet mod lys. Stamopløsningen fortyndes med den mobile fase, og standardarbejdsopløsninger fremstilles. Hver standardopløsning blev injiceret i HPLC'en 7 gange. Kalibreringsligning 10 blev beregnet ved regressionsanalyse af det bestemte topareal og den bestemte koncentration.
Kommercielt tilgængeligt komælkspulver (20 prøver) og prøver af forskellige mærker af komælksbaseret modermælkserstatning (20 prøver) blev købt fra lokale supermarkeder og apoteker i Iran til fodring af spædbørn i forskellige aldersgrupper (0-6 måneder, 6-12 måneder og >12 måneder) og opbevaret ved køleskabstemperatur (4 °C) indtil analyse. Derefter blev 1 ± 0,01 g homogeniseret mælkepulver vejet og blandet med acetonitril:vand (50:50, v/v; 5 ml). Blandingen blev omrørt i 1 minut, derefter sonikeret i et ultralydsbad i 30 minutter og endelig rystet i 1 minut. Blandingen blev derefter centrifugeret ved 9000 × g i 10 minutter ved stuetemperatur, og supernatanten blev filtreret over i et 2 ml autosampler-hætteglas ved hjælp af et 0,45 μm sprøjtefilter. Filtratet (250 μl) blev derefter blandet med vand (750 μl) og injiceret i HPLC-systemet10,42.
For at validere metoden bestemte vi genfinding, nøjagtighed, detektionsgrænse (LOD), kvantificeringsgrænse (LOQ) og præcision under optimale forhold. LOD blev defineret som prøveindholdet med en tophøjde tre gange basisstøjniveauet. På den anden side blev prøveindholdet med en tophøjde 10 gange signal-støjforholdet defineret som LOQ.
Enhedens respons blev bestemt ved hjælp af en kalibreringskurve bestående af syv datapunkter. Forskellige melaminindhold blev anvendt (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 og 1,2). Lineariteten af ​​melaminberegningsproceduren blev bestemt. Derudover blev flere forskellige niveauer af melamin tilsat blindprøverne. Kalibreringskurven blev konstrueret ved kontinuerligt at injicere 0,1-1,2 μg mL-1 af en standard melaminopløsning i modermælkserstatnings- og mælkepulverprøver, og dens R2 = 0,9925. Nøjagtigheden blev vurderet ved hjælp af procedurens repeterbarhed og reproducerbarhed og blev opnået ved at injicere prøver på den første og tre efterfølgende dage (i triplikat). Metodens repeterbarhed blev vurderet ved at beregne RSD % for tre forskellige koncentrationer af tilsat melamin. Genfindingsstudier blev udført for at bestemme præcisionen. Genfindingsgraden ved ekstraktionsmetoden blev beregnet ved tre niveauer af melaminkoncentration (0,1, 1,2, 2) i prøver af modermælkserstatning og tørmælk9,11,15.
Estimeret dagligt indtag (EDI) blev bestemt ved hjælp af følgende formel: EDI = Ci × Cc/BW.
Hvor Ci er det gennemsnitlige melaminindhold, Cc er mælkeforbruget, og BW er børns gennemsnitsvægt.
Dataanalyse blev udført ved hjælp af SPSS 24. Normaliteten blev testet ved hjælp af Kolmogorov-Smirnov-testen; alle data var ikke-parametriske tests (p = 0). Derfor blev Kruskal-Wallis-testen og Mann-Whitney-testen anvendt til at bestemme signifikante forskelle mellem grupperne.
Ingelfinger, Jr. Melamin og dens indvirkning på global fødevareforurening. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA, et al. Effekt af pH på melaminmigration i børns skåle. International Journal of Food Contamination, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP og Gilbert, IH. Målretning af giftige forbindelser mod trypanosomers indre. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF, et al. In vitro- og in vivo-evaluering af melamindendrimerer som lægemiddelafgivelsesmidler. International Journal of Pharmacy, 281(1-2), 129-132(2004).
Verdenssundhedsorganisationen. Ekspertmøder 1-4 for at gennemgå de toksikologiske aspekter af melamin og cyanursyre (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH og Lee, PK-T. Melamintoksicitet og nyrerne. Journal of the American Society of Nephrology 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. og Demir, N. Udvikling af et nyt IMAC-adsorbent til identifikation af melamin i mejeriprodukter ved hjælp af højtydende væskekromatografi (HPLC). Journal of Food Synthesis and Analysis 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. og Imim, A. Simpel spektrofotometrisk bestemmelse af melamin i flydende mælk baseret på Mannich-grøn reaktion. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. og El-Habib, R. Bestemmelse af melamin i modermælkserstatning, mælkepulver og pangasiusprøver ved HPLC/diode array-kromatografi. Journal of Environmental Analytical Toxicology, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD, og ​​Osterloh, JD Melamintoksicitet. Journal of Medical Toxicology, 6, 50–55 (2010).
Verdenssundhedsorganisationen (WHO), Toksikologi og sundhedsaspekter af melamin og cyanursyre: Rapport fra et WHO/FAO-ekspertmøde støttet af Health Canada, Ottawa, Canada, 1.-4. december 2008 (2009).
Korma, SA m.fl. Sammenlignende undersøgelse af lipidsammensætning og kvalitet af modermælkserstatningspulver indeholdende nye funktionelle strukturelle lipider og kommerciel modermælkserstatning. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. og Hashem, H. Forbedring af næringsværdi, kvalitetsegenskaber og holdbarhed af modermælkserstatning ved brug af palmeolie. Middle East Journal of Agricultural Research 6, 274–281 (2017).
Yin, W., et al. Produktion af monoklonale antistoffer mod melamin og udvikling af en indirekte kompetitiv ELISA-metode til påvisning af melamin i råmælk, tørmælk og dyrefoder. Journal of Agricultural and Food Chemistry 58(14), 8152–8157 (2010).